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考马斯亮蓝G-250法测定蛋白质含量的原理是什么
在酸性条件下，考马斯亮兰G-250染料与蛋白质疏水区结合，导致da吸收峰由465 nm 变为595 nm，同时颜色也由棕色变为蓝色,该蓝色化合物颜色的深浅与蛋白质浓度的高低成正比关系。将蛋白质样品或稀释的BSA 与Bradford试剂混合，测量在595 nm处的吸收值，在建立由一系列稀释的BSA建立的标准曲线的情况下，蛋白质的浓度可以根据标准曲线而确定。
考马斯亮蓝G-250（Coomassie brilliant blue G-250）测定蛋白质含量属于染料结合法的一种。在游离状态下呈红色，da光吸收在488nm；当它与蛋白质结合后变为青色，蛋白质-色素结合物在595nm波长下有da光吸收。其光吸收值与蛋白质含量成正比，因此可用于蛋白质的定量测定。蛋白质与考马斯亮蓝G-250结合在2min左右的时间内达到平衡，完成反应十分迅速；其结合物在室温下1h内保持稳定。
该法是1976年Bradford建立，试剂配制简单，操作简便快捷，反应非常灵敏，灵敏度比Lowry法还高4倍，可测定微克级蛋白质含量，测定蛋白质浓度范围为0～1 000μg/mL，xaio可测2.5μg/mL蛋白质，是一种常用的微量蛋白质快速测定方法。
考马斯亮蓝有G250和R250两种。其中考马斯亮蓝G250由于与蛋白质的结合反应十分迅速，常用来作为蛋白质含量的测定。考马斯亮蓝R250与蛋白质反应虽然比较缓慢，但是可以被洗脱下去，所以可以用来对电泳条带染色。
名称
一般品名：食用青色1号
英文名：Brilliant Blue FCF
性状
本品为有金属光泽，带红色的紫色粉末或颗粒，无臭味。易溶于水，呈绿色蓝色溶液 ，溶于乙醇、甘油、丙二醇。耐光、耐热性强。对柠檬酸、酒石酸、碱均稳定。
制法
由邻磺酸与N-，N-（3-磺基芐基）-缩合后氧化制得）。
质量标准
项目
指标
GB 7655.1
FAO/WHO
FCC
日本食品添加物公定书
亮蓝60
亮蓝85
含量/%≥
60.0 85.0
85
85.0
85
干燥失重/%≤
10.0
15
15
10.0
氯化物、硫酸盐/%≤
1.0
15
15
4.0
水不溶物/%≤
0.3 0.2
0.2
0.20
0.20
萃取物/%≤
0.3
-
-
-
萃取物/%≤
-
0.2
0.4
-
副染料/%≤
6.0
6.0
6.0
合格
/%≤
0.0001
0.0003
0.0003
重金属/%≤
0.001
0.004
-
0.0004
铬/%≤
0.005
0.005
0.005
0.002
锰/%≤
0.005
-
-
0.005
铅/%≤
-
0.001
0.0010
0.005
隐色体/%≤
-
5.0
5.0
-
未结合中间体及副反应物邻、间、对磺基/%≤
-
1.5
1.5
-
芐基磺酸/%≤
-
0.3 0.3
-
铜、铬、锌、锑、钡硫酸盐/%≤
总芳伯胺/%≤
0.01
保存期为5年《食用添加剂应用质量标准》（GB2760-1996）中要求：亮蓝可用于果味型饮料（液、固态）、水果汁型饮料、碳酸饮料、配制酒、糖块、点心上彩装、红绿丝、水果罐头、浓缩汁、青梅、对虾片，使用量为0.025g/kg；冰激凌，使用量为0.021999g/kg。红绿丝的使用量可翻倍；果味粉添加剂添加量按稀释液倍率的50%添加【使用说明】将规范称重的本产品放置器皿中，慢慢添加适量温开水，并持续拌和使之彻底融解，个人所得水溶液就可以用于上色。应用全过程中应留意尽量减少或降低酸、碱、y化剂、氧化剂、金属材料电离、微生物等化学物质的影响，并留意防止受高溫与曝晒，防止退色或变色。
以上信息由专业从事洁厕灵亮蓝供应商的富舜新材料于2025/1/1 16:14:52发布
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